不溶性微粒的檢測對注射用藥來講是必須要檢測的一個指標，在很早之前這個指標的檢測是沒有要求的！今天我們來梳理下UPS788和CP0903對不溶性微粒指標檢測的發展過程和未來的趨勢，希望可以給廣大的制藥同行帶來些許有用的信息和幫助。也歡迎大家來電咨詢溝通。上海梓夢科技有限公司為您提供全面的粒度和zeta電位分析解決方案。

1.USP788的發展歷程

1905 –USP首次將腸胃外溶液作為藥典藥物。沒有提及顆粒物含量或凈度。

1916年NF IV包含6篇注射液專著；然而，沒有提到外觀。

1936 NF VI 包括凈度的定義，定義為“透明度”：

1942年，USP XII和NF VII都試圖進一步界定“基本上沒有”一詞的意圖。

1946 USP包括術語“基本上沒有”一詞。

1949年USP修訂委員會去掉了透明度測試，并將其替代為要求“…在注射的準備中應該謹慎行事以防止污染”，“…每次注射在最終容器中都要進行目視檢查” 。

1965年 澳大利亞堪培拉國家生物標準實驗室出版了微粒標準，澳大利亞第一次提出限制標準，刺激了美國的制約和監管活動。

1966年 FDA大容量腸胃外用藥安全研討會；

1972年 澳大利亞對腸胃外用藥的Coulter和光阻法計數進行比較；

NMT=No more than

NMT 100 顆粒/mL ≥2μm

NMT 5 顆粒/mL ≥20μm

1974年 外國顆粒標準的修訂

大不列顛

NMT 1000 顆粒/mL ≥ 2μm

NMT 100 顆粒/mL ≥ 5μm

澳大利亞

NMT 1000 顆粒/mL ≥ 2μm

NMT 250 顆粒/mL ≥ 3.5μm

NMT 100 顆粒/mL ≥ 5μm

NMT 25 顆粒/mL ≥ 10μm

NMT 2 顆粒/mL ≥ 20μm

1974年 USP于1974年12月提出：

NMT 50 顆粒/mL ≥ 10μm

NMT 5 顆粒/mL ≥ 25μm

1974年年底USP發布了LVP標準；

1975年 USPXIX <788>章節使用膜顯微鏡法測試評估大容量注射的顆粒（大容量是指超過100mL/瓶）。

1980年 英國藥典發布了新的標準，使用電阻法（Coulter）或消光法（HIAC）儀器。

1984年USP修訂<788>以區分LVP使用膜顯微鏡和SVP使用HIAC提出的限度：

1985年USP XXI<788>章節中，小容量腸胃外用藥（SVP，100mL和更低體積）中增加一種新的消光（光阻）方法。

1986年1月1日，SVP標準和測試方法成為正式文件。

1990年 USP XXII 通過膜定義了新的限制條件

1995年 USP 23 <788> 將光阻法改為首選或第一方法。顯微計數法作為第二法。

判定標準做了修改并沿用至今：

2004年 美國藥典USP27對滴眼液新章節<789>做了規定:

歐洲藥典（Ph.Eur.）和日本藥典（JP）這兩個重要的非美國藥典組織針對粒子限度將收錄USP變更為收錄SVI。

Ph. Eur. 在2005年變更為收錄 SVI 產品。

JP 是在2006年升級收錄SVI產品。

2007年 三個組織統一了<788>方法，USP <788>，EP和JP 等。

2010年 USP粒度研討會提及Flow Imaging Method用來測試蛋白產品

2017年 USP40收錄不溶性微粒檢測第三法-微流圖像法Flow Imaging method。

2.《中國藥典》CP0903對不溶性微粒檢測規定發展歷程梳理

1985年 《中國藥典》收載注射液中不溶性微粒檢測方法，至1995年采用顯微計數法檢查

2000年 《中國藥典》增加光阻法為不溶性微粒檢測第二法，＞100ml LVP

2005年 《中國藥典》將光阻法由第二法改為第一法，作為首選方法。SVP+滅菌粉末

2010年 《中國藥典》CP0903更新，和國際接軌保持一致。

-至今沒有做大的更新。

3.不溶性微粒檢測第一法-光阻法不溶性微粒儀概況介紹

目前光阻法不溶性微粒儀國內外廠家比較多，技術比較成熟，操作軟件基本都符合制藥行業中21CFR Part11的要求。主要的廠家品牌有美國貝克曼庫爾特、德國Cloze、美國PSS、美國PMS，進口各品牌性能上各有優勢。國產品牌主要有天津天河和天大天發，近幾年有幾個國產品牌也相繼誕生，產品還有待市場檢驗。

光阻法不溶性微粒儀原理如下圖：

光阻法結構比較簡單，如圖一，激光光源發射激光經過樣品池，樣品池中的顆粒流經樣品池，顆粒會對激光有遮擋作用，使得右側檢測器接收到的激光信號減少，光信號轉換成電壓脈沖值，顆粒越大遮擋的面就越大，檢測到的信號差就越大。從而得到粒度大小和數量。

光阻法不溶性微粒儀適用的劑型主要有，澄清的大輸液、小針劑、凍干粉、滴眼劑等。對于一些帶有顏色的、粘稠度大的、不透明的樣品如注射乳劑、脂質體、白蛋白、混懸劑、mRNA等就沒法用光阻法進行測試了，需要采用顯微計數法不溶性微粒儀測試。

4.不溶性微粒檢測第二法-顯微計數法不溶性微粒儀介紹

隨著醫藥行業技術的發展進步，很多特殊復雜制劑的增多，如mRNA、乳劑、脂質體、混懸劑等，越來越多的品種已經無法采用光阻法檢測不溶性微粒，需要選擇顯微計數法（顯微鏡法）來做測試，USP788稱為Microscopic (Membrance Microscope Method)。

從《中國藥典》CP0903建立，大部分的用戶都是采用常規的反射光源顯微鏡來做測試，人工進行測量和計數。此種方法的優點是成本低，對于顆粒可以很好的人眼進行識別。缺點也很明顯，無法避免人為因素帶來的誤差，從法規上來看無法實現審計追蹤。

鑒于此上海梓夢科技有限公司利用顯微鏡搭載自動移動平臺，通過操作軟件來控制平臺的移動，對測試濾膜做逐行掃描，對整個濾膜做掃描、拼圖、合成為一張完整的濾膜圖片做分析，并按照藥典規定出具數據報告。

5.梓夢科技MIP-01Z和ZMP930全自動顯微計數法不溶性微粒儀介紹：

5.1設備構成

型號ZMP930和MIP-01Z全自動顯微計數法不溶性微粒儀主要是由顯微鏡主機、自動移動平臺、操作分析軟件構成，有關的具體的操作也歡迎大家來電咨詢。

5.2顯微計數法不溶性微粒儀需要注意的幾個細節：

5.2.1 顯微鏡的選擇需要選擇反射光源（落射光源）

5.2.2 放大倍數要確保是100倍

5.2.3 光源角度可調

5.2.4 軟件符合21CFR Part11要求

5.2.5 濾膜的選擇

5.2.6 測試環境的選擇

6.上海梓夢科技ZMP-910全自動顯微計數法不溶性微粒儀

型號ZMP910全自動顯微計數法不溶性微粒儀在MIP-01Z的基礎上，結合用戶的反饋，做了全新升級，符合《中國藥典》CP0903的檢測要求。

設備特點：

1）符合ISO 13322-1靜態圖像法粒度儀標準要求

2）擺脫原有顯微鏡結構，將光學放大部分設計成一體

3）軟件符合21CFR Part11要求

4）標準的放大倍數100倍

5）自帶防塵罩

6）可以給出粒度分布、粒形分布結果

7）按照《中國藥典》CP0903、USP788等標準出具報告

8）自定義報告

7.不溶性微粒檢測第三法-微流圖像法（Flow Imaging）不溶性微粒儀

隨著生物醫藥的發展，對不溶性微粒的檢測要求又提出了新的挑戰，就是硅油、蛋白自身的聚集的問題，這兩種方法會把蛋白本身判定為不溶性顆粒。如此常規的光阻法和顯微計數法不溶性微粒儀的測試都存在一定的限度。需要新的微流動態圖像法（Flow Imaging）儀器做測試。此種方法目前在USP1788中有收錄，而在《中國藥典》中尚未收錄，此種方法已然是一種趨勢，感興趣的客戶可以做些了解。

梓夢科技M3000 微流圖像法不溶性微粒儀采用動態圖像法原理（Flow Imaging），符合ISO 13322-2標準要求。

產品主要特點有：

1）采用微流圖像法（Flow Imaging），無需像顯微計數法不溶性微粒儀一樣做繁瑣的樣品過濾等前處理；

2）測試范圍寬，可以達到0.5μm-1200μm；

3）采用自動變倍遠心鏡頭，無需更換不同倍率鏡頭；

4）采用1200萬像素的高清智能成像系統，分辨率達4096*3000

5）自動區分蛋白聚集體、硅油、顆粒等

6）給出近30中不同粒度、粒形參數

今天對于不溶性微粒的檢測方法和歷史演變過程做了簡單的梳理，現有方法的簡單介紹。希望可以給大家帶來一些幫助，如需要更詳細信息或者測試中遇到的各種問題，歡迎大家來電咨詢上海梓夢科技，文中如有雷同或者錯誤之處，也請大家提出寶貴意見。