上期我們說了關(guān)于光阻法和顯微計數(shù)法不溶性微粒儀檢測的優(yōu)缺點(diǎn)以及在什么情況下用顯微計數(shù)法不溶性微粒儀檢測在什么情況下用光阻法檢測，這期梓夢編輯部就專門說說關(guān)于光阻法的操作流程和操作標(biāo)準(zhǔn).

不溶性微粒檢查法（《中國藥典》2010年版二部附錄IX C）系在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢測靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射液無菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。

《中國藥典》規(guī)定了兩種檢查方法即光阻法和顯微計數(shù)法。當(dāng)光阻法測定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測定時，應(yīng)采用顯微計數(shù)法不溶性微粒儀進(jìn)行測定，并以顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的測定結(jié)果作為判定依據(jù)。

什么是光阻法？

光阻法是當(dāng)一定體積的注射液通過一窄小的檢測區(qū)時,與液體流向垂直的入射光，由于被供試液中的微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號降低,這種信號變化與微粒的截面積大小相關(guān)，再根據(jù)通過檢測區(qū)供試液的體積，計算出1ml供試液中含10μm以上（≥10um）及含25μm以上（≥25um）的不溶性微粒數(shù)。

光阻法的實(shí)驗(yàn)環(huán)境、儀器與用具

實(shí)驗(yàn)環(huán)境 實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境應(yīng)不得引入外來微粒，測定前的操作在層流凈化臺中進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品均應(yīng)潔凈，無微粒。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經(jīng)不大于1.0μm的微孔濾膜濾過。

光阻法儀器裝置 光阻法不溶性微粒測定儀通常包括定量取樣器、傳感器和數(shù)據(jù)處理器三部分。測量粒度范圍為2～100μm，檢測微粒濃度為0～10000個/ml。不溶性微粒測定儀應(yīng)定期校正與檢定（至少每6個月校正一次），并符合規(guī)定。

光阻法操作方法

檢查前的準(zhǔn)備

取50ml微粒檢查用水（或其他溶劑）經(jīng)微孔濾膜（一般孔徑為0.45μm）濾過，置于潔凈的適宜容器中，旋轉(zhuǎn)使可能存在的微粒均勻，靜置待氣泡消失。按光阻法項下的檢查法檢查，每10ml中含10μm以上的不溶性微粒應(yīng)在10粒以下，含 25μm（≥25um）以上的不溶性微粒應(yīng)在2粒以下。否則表明微粒檢查用水（或其他溶劑）、玻璃儀器和實(shí)驗(yàn)環(huán)境不適于進(jìn)行微粒檢查，應(yīng)重新進(jìn)行處理，檢測符合規(guī)定后方可進(jìn)行供試品檢查。

供試品應(yīng)事先除去外包裝，并用凈化水將容器外壁沖洗干凈，置適宜實(shí)驗(yàn)環(huán)境中備用。

光阻法檢查法

標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時間脫氣，置于取樣器上（或?qū)⒐┰嚻啡萜髦苯又糜谌悠魃希ｉ_啟攪拌器，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定至少3次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。記錄數(shù)據(jù)；另取至少2個供試品，同法測定。每個供試品第一次數(shù)據(jù)不計，取后續(xù)測定結(jié)果的平均值計算。

用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當(dāng)時間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個供試品，同法測定。第一個供試品的數(shù)據(jù)不計，取后續(xù)測定結(jié)果的平均值計算。

也可采用適宜的方法，在層流凈化臺上小心合并至少3個供試品的內(nèi)容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2min或適當(dāng)時間脫氣，置于取樣器上，開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計，取后續(xù)測定結(jié)果的平均值計算，根據(jù)取樣體積與每個容器的標(biāo)示裝量體積，計算每個容器所含的微粒數(shù)。

靜脈注射用無菌粉末 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑）,小心蓋上瓶蓋，緩慢振搖使內(nèi)容物溶解，靜置2分鐘或適當(dāng)時間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個供試品，同法測定。第一個供試品的數(shù)據(jù)不計，取后續(xù)測定結(jié)果的平均值計算。

也可采用適宜的方法，取至少3個供試品，在層流凈化臺上用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，小心合并至容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2min或適當(dāng)時間脫氣，置于取樣器上，開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計，取后續(xù)測定結(jié)果的平均值計算，根據(jù)取樣體積與每個容器的標(biāo)示裝量體積，計算每個容器所含的微粒數(shù)。

供注射用無菌原料藥 按品種項下規(guī)定，取供試品適量（相當(dāng)于單個制劑的最大規(guī)格量），置取樣杯或適宜的容器中，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑）,緩慢振搖使內(nèi)容物溶解，靜置2分鐘或適當(dāng)時間脫氣，小心開啟容器，將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個供試品，同法測定。第一個供試品的數(shù)據(jù)不計，取后續(xù)測定結(jié)果的平均值，計算每個容器所含的微粒數(shù)。

記錄與計算 記錄應(yīng)包括所用儀器型號、樣品包裝情況、檢驗(yàn)數(shù)量以及注射用無菌粉末和供注射用無菌原料藥的溶解情況等，根據(jù)微粒測定儀數(shù)據(jù)處理器打印出相應(yīng)的數(shù)據(jù)，計算出供試品每1ml（或每個容器或每份樣品）中所含10μm以上（≥10um及含25μm以上（≥25um）的不溶性微粒數(shù)。

注意事項

光阻法不適于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，如乳劑、膠體溶液、混懸液、脂肪乳、甘露醇注射液等，也不適用于進(jìn)入傳感器時容易產(chǎn)生氣泡的制劑（如碳酸鹽緩沖液制成的制劑）。對于一些溶解性差的樣品，樣品在管道中與水相混時，可能會在局部析出沉淀，這不僅會使即得結(jié)果偏高，也可能造成管路堵塞，出現(xiàn)該情況時應(yīng)考慮采用顯微計數(shù)法。

供試品的檢查數(shù)量：為確保檢查結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義，除另有規(guī)定外，一般應(yīng)取供試品3瓶（支）以上進(jìn)行不溶性微粒檢查。在多支樣品的測定過程中，應(yīng)盡量保持操作的一致性（如容器翻轉(zhuǎn)次數(shù)、取樣方式、除氣泡方式、攪拌速度等），以確保測定結(jié)果的可靠性。

對于小容量注射液，可以采用直接取樣法測定，也可以采用多支內(nèi)容物合并法測定。直接取樣法可考察多支樣品檢查結(jié)果的重現(xiàn)性，體現(xiàn)各容器間的差異。當(dāng)選用直接取樣法測定時，為避免供試品溶液與儀器管路中的水在相溶過程中可能產(chǎn)生的氣泡、乳光等導(dǎo)致測定數(shù)據(jù)偏高的現(xiàn)象，應(yīng)先將前幾個容器的測定數(shù)據(jù)棄去，使供試品溶液充滿管路，然后讀取后續(xù)容器的測定數(shù)據(jù)作為供試品的測定結(jié)果。在小容量注射液直接取樣的檢測過程中，一定要避免吸入氣泡。一旦吸入氣泡，應(yīng)使用微粒檢測用水或其他適宜溶劑對管路進(jìn)行充分清洗，直至氣泡消失。當(dāng)采用合并法取樣時，其關(guān)鍵步驟在于安錇是小容量注射劑的主要包裝形式，雖然通常都為易折安瓿，但在實(shí)際操作中很多安瓿并不“易折”，盡管用砂輪割據(jù)安瓿會大量增加微粒，但有時卻是開啟安瓿時的必要操作步驟。實(shí)際操作中如果在割據(jù)之后直接掰開，會大量引入微粒。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，認(rèn)為在保證開啟安瓿的情況下應(yīng)盡量減少劃痕的長度和力度，掰開前增加用水清洗的操作過程。安瓿打開后，大量微粒集中于玻璃斷口處，經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，認(rèn)為用干凈注射器抽取轉(zhuǎn)移的方法可以減少瓶口碎屑的干擾。此外，采用較粗的針頭抽取溶液，可減少氣泡的產(chǎn)生。

注射用無菌粉末一般先用微粒檢查用水或適宜溶劑溶解后，再采用直接取樣法或合并取樣法的測定。在某些品種（如頭孢替唑鈉、頭孢曲松鈉等）的檢測中發(fā)現(xiàn)，同一批樣品采用不同體積的溶劑溶解后，微粒測定結(jié)果差異較大，這可能與藥物性質(zhì)等因素有關(guān)。經(jīng)試驗(yàn)研究，這些品種在某一個濃度范圍內(nèi)，不溶性微粒數(shù)與主藥濃度呈線性關(guān)系，故這些品種一般在正文項下均規(guī)定了不溶性微粒測試溶液的濃度，應(yīng)依法操作。

當(dāng)光阻法測定結(jié)果不符合規(guī)定時，應(yīng)采用顯微計數(shù)法不溶性微粒儀進(jìn)行復(fù)驗(yàn)，并以顯微計數(shù)法不溶性微粒儀為判斷依據(jù)。

結(jié)果與判定

標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈注射液 除另有規(guī)定外，每1ml中含10μm以上（≥10um）的微粒不超過25粒，含25μm以上（≥25um）的微粒不超過3粒，判為符合規(guī)定。

標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料 除另有規(guī)定外，每個供試品容器（份）中含10μm以上（≥10um）的微粒不得過6000粒，含25μm以上（≥25um）的微粒不得過600粒，判為符合規(guī)定。

以上就是梓夢編輯部對不溶性微粒檢查法之光阻法的操作規(guī)程的闡述，下期我們接著說關(guān)于顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的檢測方法，我們下期見。